ELISA試劑盒不可忽略的細(xì)節(jié)問題

ELISA試劑盒不可忽略的細(xì)節(jié)問題

ELISA試劑盒又稱為酶聯(lián)免疫試劑盒，酶的高效催化性與抗原抗體的特異性相結(jié)合的一門技術(shù)。

檢測原理：ELISA是將酶催化的放大作用與特異性抗原抗體反應(yīng)結(jié)合起來的一種微量分析技術(shù)。酶標(biāo)記抗原或抗體以后，既不影響抗原抗體反應(yīng)的特異性，也不改變酶本身的活性。因為ELISA試劑盒價格低廉且準(zhǔn)確性搞、反應(yīng)時間短等優(yōu)點，所以適合大批量的檢測，一般常常用于食品安全檢測方面。

檢測方法ELISA方法是一種特異、敏感的檢測方法，可分為： 間接競爭抑制法、抗體/抗原包被直接競爭法。

檢測產(chǎn)品

適用于真菌毒素檢測、獸藥殘留檢測、疫病抗體檢測等。

操作原理：

ELISA的操作步驟：樣品收集保存、試劑準(zhǔn)備、洗板、加樣、加酶標(biāo)抗體、孵育、顯色反應(yīng)、終止反應(yīng)、結(jié)果判定。

實驗過程溶液配制：容器、溶劑、藥品

樣品處理：儀器、耗材

檢測過程：時間、溫度

結(jié)果分析：軟件

注意事項：

樣本處理過程：均質(zhì)

溶液配制過程：稀釋

前處理過程：稱樣、渦動、離心、取上清

檢測過程：加樣、洗板、溫度及時間

分析過程：稀釋系數(shù)、濃度單位

1． 試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲存，使用前恢復(fù)到室溫。

2． 實驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。

3． 不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。

4． 使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。

5． 使用干凈的容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種試劑。

6． 洗滌酶標(biāo)板時應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。

7． 加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)板孔孵育的時間一樣。

8． 按照說明書中標(biāo)明的時間、加液的量及順序進行操作。

ELISA試劑盒需要遵循的3個要點：

1.抗原或抗體能吸附于固相載體表面，并保持其免疫學(xué)活性;

2.抗原或抗體可通過共價鍵與酶連接形成酶結(jié)合物，而此種酶結(jié)合物仍能保持其免疫學(xué)和酶學(xué)活性;

3.酶結(jié)合物與相應(yīng)抗原或抗體結(jié)合后，可根據(jù)加入底物的顏色反應(yīng)來判定是否有免疫反應(yīng)的存在，而且顏色反應(yīng)的深淺是與樣本中相應(yīng)抗原或抗體的量成比例關(guān)系的，可根據(jù)已知濃度標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的吸光度值繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并依此計算出未知樣品中抗體或抗原的濃度。